二、本论文的主要创新点

三、展望

参考文献

攻读硕士学位期间取得的研究成果

致谢

附件

文章摘要:胃蛋白酶原I（PGI）是反应胃粘膜炎症的重要标志物,其水平的监测在胃部功能评估中具有不可或缺的作用。建立一种快速、特异性强和灵敏度高的检测方法对于胃部疾病的防控和治疗具有重要意义。本研究基于磁微粒建立化学发光检测PGI方法。研究工作与结果如下:1.抗体原料筛选。首先,通过抗体效价筛选适宜抗体原料,结果其中7株抗体（B1、B2、C2、D1、D2、E1、E2）的效价均可达1×10^-6 mg/mL。其次,进行抗体配对筛选,结果基于化学发光平台通过棋盘滴定法初步筛选出8对信噪比较高的抗体。最后,使用临床样本进行最佳抗体对筛选,结果当E1作为包被抗体、E2作为标记抗体时,检测结果与对照试剂盒相关性最高（R~2=0.9810）。最终选用该抗体对进行化学发光平台的建立和优化。2.PGI磁微粒化学发光检测方法的建立。磁微粒包被抗体,磁性微粒选择Tosyl磁微粒,其大小分布均匀且包被抗体前后分散性好;抗体包被浓度为200μg/mL时,免疫磁微粒的稳定性最好,水合粒径最小;最佳包被工艺为:包被温度37℃,包被缓冲液的pH=7.5,包被时间20 h,封闭剂为1%的BSA。碱性磷酸酶标记另一抗体,碱性磷酸酶与抗体的比例为5:1,交联剂与抗体的比例为10:1,标记缓冲液pH=7.5时,信噪比最高。缓冲液体系优化,其中磁微粒抗体稀释液为Tris缓冲液,pH=7.5,37℃的热加速稳定性最好,偏倚为-2.98%。碱性磷酸酶抗体稀释液为MES缓冲液,pH=7.5,稳定剂为4%的甘氨酸时,37℃的热加速稳定性最好,偏倚为-5.56%。化学发光反应体系优化,最佳反应参数为:反应模式为一步法双抗夹心,磁微粒抗体稀释比为1:25,碱性磷酸酶抗体稀释比为1:1000,孵育时间为5 min,样本量为20μL。3.PGI磁微粒化学发光检测方法的性能评价。经系统评价,本方法的线性范围为0～200 ng/mL（R~2=0.9991）,灵敏度为0.048 ng/mL,方法线性范围宽,灵敏度高。分析内变异系数分别为3.26%、2.89%,分析间变异系数分别为4.83%、3.39%,变异系数CVs均小于5%,精密度良好。平均回收率为96.81%,准确度较好。在高浓度剂量测试中,发光值的非线性在400 ng/mL时出现,在1600 ng/mL时显著降低,但是这些剂量水平远超出临床动态范围,对临床应用不构成影响。样本中添加胆红素0.22 mg/mL、甘油三酯33 mg/mL、血红蛋白5 mg/mL、总蛋白0.22 mg/mL,对检测PGI无干扰,且与PGII无交叉反应,方法抗干扰能力强、特异性好。试剂盒置于37℃条件下放置1、4和7天稳定性良好,预测在试剂盒2～8℃条件下可以储存12个月,方法稳定性高。4.PGI磁微粒化学发光检测方法的临床应用评价。使用批量临床样本对方法与雅培直接化学发光方法进行相关性分析,结果回归方程为y=1.008x+0.272,相关系数R~2=0.9981,两者相关性良好。Bland-Altman一致性分析,两者的一致性达到95.84%,两种方法测定结果无差异。对于不同的样本类型,EDTA-K₂血浆、肝素钠血浆、肝素锂血浆检测结果与血清检测相关性良好,无显著差异,因此本方法临床适用性较强。探索样本保存条件,结果血清样本置于2～8℃条件下保存不可超过7天,置于-20℃与-80℃条件下,可保存21天,冻融次数控制在3次以内均可满足临床测试要求。综上所述,本研究所构建的磁微粒化学发光分析方法可以用于PGI的临床快速检测,为胃功能健康大规模筛查提供有力的工具。

文章关键词:

论文作者:柳方方 柳方方 

作者单位:柳方方 

论文DOI:10.27151/d.cnki.ghnlu.2021.001626

论文分类号:R446.1;O657.3

文章来源：《广州化学》 网址: http://www.guangzhouhuaxue.cn/qikandaodu/2022/0705/807.html